鬼筆環肽|phalloidin|鬼筆鵝膏素
鬼筆環肽從一種毒性菇類中分離的劇毒生物堿，C35H48N8O11S。無色，細針狀結晶，系從毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中得到的有毒的環狀七肽。與鵝膏蕈堿（amanitin）一起存在，毒性比鵝膏蕈堿弱，對小鼠的致死劑量是50微克，對人體也有很強的毒性，可引起流涎、嘔吐、便血、發紺、痙攣、肌肉攣縮，以致死亡。它同細胞松弛素Ｂ的作用相反, 只與聚合的微絲結合, 而不與肌動蛋白單體分子結合。它同聚合的微絲結合后, 抑制了微絲的解體, 因而破壞了微絲的聚合和解聚的動態平衡。鬼筆環肽可以與聚合的微絲結合的特殊性質使得它具有一個頗富前景的用途：通過讓這種**吸附于熒光染料上面，研究人員可以研究細胞的內部工作機制，窺視細胞如何分裂。通過這些觀察，他們可以揭開癌癥工作機制和組織生長之謎。
美國加州大學圣克魯斯分校的兩位化學家斯科特·洛基和勞拉·舒利斯科(Laura Schuresko)利用一種稱為固相合成(solid-phase synthesis)的手法，制造出這種致命物質。他們不是將幾種化學物質放入燒瓶混合，讓它們自由飄浮，而是在化學反應期間對其中一種化學物質進行適當約束，這樣一來，研究人員在復雜的化學反應過程中可以更好地對其進行控制。
FITC和Rhodamin等熒光物質標記的鬼筆環肽可特異的與真核細胞的F-actin結合，從而顯示微絲骨架在細胞中的分布。鬼筆環肽的配制：0.1mg鬼筆環肽溶于1ml無水甲醇（也可用DMSO或無水乙醇溶解）配成貯存液，可在-20度避光的條件下長期保存，工作液的濃度為5ug/ml，由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
染色程序：生理鹽水PBS清洗細胞2次，每次10分鐘；3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘，生理鹽水PBS清洗細胞2次；加入5ug/ml的FITC-鬼筆環肽室溫染色30-60分鐘，夏季時間可以短一些，生理鹽水PBS清洗細胞2次；DAPI或hoechst33258染細胞核10分鐘，生理鹽水PBS清洗細胞2次；吸去多余水分，加熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油），蓋上蓋玻片，熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
注意事項：鬼筆環肽的分子量小，很容易通過細胞，不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。毒性較大，戴上手套操作。
| Conjugate | Cat.# | Wavelengths (Ex/Em) | Brightness (AFU*) | Stability to
photobleaching
(half life in seconds) | Background
(% of total
AFU at 100nM) | Affinity
(Kd in
nanomolar) |
| Fluorescein-phalloidin | na | 485/535 FITC filter set | 432 | 6 | 22 | 72 +/-12 |
| Acti-stain™ 488 | PHDG1 | 485/535 FITC filter set | 832 | 57 | 5 | 55 +/-8 |
| Acti-stain™ 535 | PHDR1 | 535/585 TRITC filter set | 430 | 27 | 12 | 36 +/-7 |
| Acti-stain™ 555 | PHDH1 | 535/585 TRITC filter set | 551 | 46 | 16 | 63 +/-8 |
| Acti-stain™ 670 | PHDN1 | 640/680 Cy5 filter set | 332 | 8 | 18 | 50 +/-12 |
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| 產地 | 貨號 | 名稱 | 規格 | 貨號 | 單價 |
| cytoskeleton | PHDR1 | Rhodamine Phalloidin 羅丹明標記 | 500ul | PHDR1 | 1818元 |
| cytoskeleton | PHDG1-A | Acti-stain™ 488 phalloidin 綠色熒光標記 | 500u | PHDG1-A | 2298元 |
| cytoskeleton | PHDH1-A | Acti-stain™ 555 phalloidin 紅色熒光標記 | 500u | PHDH1-A | 2298元 |
| cytoskeleton | PHDN1-A | Acti-stain™ 670 phalloidin藍色熒光標記 | 500u | PHDN1-A | 2298元 |
Cytoskeleton公司成立于1993年，專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。Cytoskeleton公司的鬼筆環肽品質不會比Invitrogen公司旗下品牌Molecular Probes品質差，國內有很多實驗室在廣泛使用。Cytoskeleton公司提供**篩選、信號轉導、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現有產品的**篩選服務。
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Phalloidin–Tetramethylrhodamine B isothiocyanate
Phalloidin from Amanita phalloides
別名: Phalloidin-TRITC
性質
| Related Categories | In Vivo/In Vitro Tracking of Stem Cells, Actin Inhibitors and Probes, Albumin and other protein conjugates, Bioactive Small Molecules, Biochemicals and Reagents, |
| biological source | Phalloidin from Amanita phalloides |
| fluorescence | λex 540-545 nm; λem 570-573 nm |
| storage temp. | −20°C |
參考文獻
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Functional Characterization Of Negri Bodies (NBs) In Rabies Virus-infected Cells: Evidence That NBs Are Sites Of Viral Transcription And Replication. Lahaye, X., et al. J. Virol. 83, 7948-58, (2009)
Sds22, A PP1 Phosphatase Regulatory Subunit, Regulates Epithelial Cell Polarity And Shape [Sds22 In Epithelial Morphology]. Grusche, F.A., et al. BMC Dev. Biol. 9, 14, (2009)
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