蛋白的使用以及存儲
重組蛋白中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),并且
通過常以*少量的鹽來進行凍干處理,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后,務必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現象)。
1、 離心:高速離心(10000rpm)20-30秒,或低速離心(2000rpm)5分鐘。
2、 溶解:用去離子水或其他緩沖液(根據說明書要求進行選擇)溶解至說明要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/ml),如10ug的產品,需用10ul-100ul的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩,避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間,待細胞因子完全溶解后使用。溶劑的選擇:
1) 要求用去離子水溶解的產品,務必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用鹽溶液溶解的產品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3、分裝和儲存:蛋白溶解后可根據自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中*好含有5-10%的FCS(小牛或胎牛血清)或0.1%的BSA(牛血清白蛋白)來穩定蛋白。工作液在4℃可保存一周,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃(注意:不可凍存于-80℃)。分裝時每管中工作液的體積*好是一次實驗的用量,以實現每次實驗用完一只工作量,避免反復凍融引起蛋白活性的降低。
細胞因子和蛋白的使用說明
1、 正確性:經N端序列分析。必要時,使用SDS-PAGE,RP-HPLC和質譜分析等方法與標準品進行比對。
2、 純度:經SDS-PAGE和RP-HPLC分析。
3、 生物活性:經相關的體外或體內生物活性檢測。
4、 蛋白含量:經紫外分光光度和SDS-PAGE分析。有些特殊產品的定量使用HPLC法與己校準的標準品進行比對。
5、 內**含量:經動態LAL(鱟試劑)法測定,所有產品內**含量均低于標示量。
6、 微生物污染:所有蛋白溶液在分裝凍干前經0.22um濾膜過濾**,分裝在一萬級潔凈室條件下的超凈臺完成;凍干在一萬級潔凈室條件下完成。
為什么有些產品中我能看到白色蛋白粉末而有些產品管中看不到蛋白粉末?
答:與市場上的有些蛋白產品不同,絕大部分的產品中不含載體蛋白或其他添加物(如牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白(HSA)和海藻糖等),并且以*低含鹽量的溶液凍干。因此,微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內,形成很薄或幾乎看不見的蛋白層,甚至蛋白粉末還會飄懸在管壁上。打開管蓋前,我們建議在離心機中快速離心20-30秒,使附著在管蓋或管壁的蛋白粉末聚集到管底。
對于蛋白產品的穩定性,我們應該了解哪些信息?
答:除非在產品說明書中特別注明,我們絕大部分產品均為凍干粉,它們在室溫條件下非常穩定。盡管如此,我們還是建議您將凍干粉產品儲存于-20℃冰箱中。對于大多數產品,復溶后在4℃條件下僅能短期保存。如果想長期保存,請先配置成稀釋液(其中須含載體蛋白,如0.1%BSA等),然后根據實驗情況分裝成小份凍存于-20℃,每次實驗僅取一小份,避免反復凍融。請注意,每次凍融均會引起蛋白的部分失活,而且不同蛋白失活的程度不一。