近年來，瘋牛病、瘦肉精事件的連續發生，人們震驚之余發現飼料在某種條件下不僅構成了對動物和人類健康的嚴重威脅，而且造成了意想不到的經濟損失和巨大的政治影響。飼料**作為食品**中的一個源頭環節，成了上至國際組織、政府部門，下至平民百姓，各個層面廣泛關注的熱點問題。世界上很多國家及非政府組織都積極加人了飼料、食品**控制行列。各個國家與地區也都加大力度強化相關的組織機構，制定一系列的法律法規，如美國、日本修訂了飼料**法，歐盟成立了歐洲食品管理局，并將實行新的飼料食品管理法規，我國也頒布了《飼料和飼料添加劑管理條例》，實施了飼料**工程。然而，再好的政策和措施都離不開飼料檢測的技術支持，檢測結果不僅是制定政策和標準如MRL的科學基礎，也是采取重***律行動和解決貿易糾紛的重要依據。近年來，執行*有效、影響面*廣的是飼料食品**檢測中有關違禁藥品及獸藥殘留執法分析的逐級檢測法。主要為篩選法、確證法和定量法。

篩選法是實施檢測的**步，用于大量樣品的高通量分析。目的是檢測某種或某類危害物是否存在。它簡單快速不需要特殊的場地，不需要大型儀器設備，花費一般也較低。篩選法基于許多原理，但目前應用*多的是酶聯**法(ELISA)。如飼料中違禁藥品鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、安定、呋喃唑酮、己西雌酚的檢測，尿液中鹽酸克侖特羅、豬肝鹽酸克侖特羅、牛奶中氯霉素的殘留檢測的各種試劑盒都屬酶聯**法(ELISA)。

自治區獸藥飼料監察所從2000年就開始用酶聯**法檢測飼料中鹽酸克侖特羅，到2004年開始大批量承擔農業部及自治區下達的飼料**檢測項目，主要為飼料、飲水、尿液中鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、安定、呋喃唑酮、己西雌酚的檢測。根據農業部要求首先用酶聯**法進行篩選，檢測出陽性者用高效液相色譜儀和氣質聯用儀進行確證和定量。本人就這幾年應用酶聯**法進行初篩檢測中存在的問題及注意事項進行探討，以供同行參考。 

1、試劑盒的選擇

目前酶聯**法檢測用試劑盒種類繁多，有國外進口的，有國內自行研制生產的，如何在眾多的品牌中選擇既能滿足檢測要求又價格低廉的試劑盒是一個問題。本人根據使用這些試劑盒，在實際檢測中發現，一般在試劑盒說明書中列出以下指標：*低檢測限；回收率；交叉反應率；標準曲線圖譜及數據，標準曲線至少由5個濃度組成；IC50測定值及變形曲線點數目的是比較規范的試劑盒，可以選擇。

2、臨界值(cut-off)的確定

在實際使用酶聯**法檢測時要首先確定臨界值。通過檢測結果與臨界值的比較，可判定樣品為陰性或可疑。對于禁用**，檢測方法的臨界值為定量限，即現有的公認的儀器檢測所能達到的*低定量限。對于有*高殘留限量(MRL)的**，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復3次測定的均值減去1．64倍標準差。檢測結果如小于臨界值為陰性，大于或等于臨界值或標準規定為可疑，需要用確證法確證。

3、檢測限的測定 可添加MRL和MRL上下各一個濃度。

每個試驗室在使用酶聯**法檢測時，應做一下各自試驗室的檢測限。檢測限為20份空白樣品測定的均值加3倍標準差。如果經規范操作后所得檢測限大于臨界值時，說明試劑盒背景干擾大，試劑盒靈敏度不能滿足檢測要求，應與試劑盒廠家聯系或棄去不用選用另外的試劑盒。

4、酶聯**檢測方法驗證

在使用酶聯**法檢測樣品時，應對方法進行驗證。主要測定以下內容：

（1）標準曲線的測定，標準曲線至少由5個濃度組成，測定次數不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近，檢測靈敏度高。

（2）樣品檢測限的測定。

（3）樣品添加回收實驗。對禁用**可添加定量限和2倍定量限，對于有*高殘留限量(MRL)的**，可添加MRL和MRL上下各一個濃度。

準確度：若回收率大于40％符合相應檢測標準的要求。精密度：批內變異系數每批平行樣之間的變異系數小于或等于25％，對于禁用**小于或等于30％。批間變異系數所有樣品間變異系數小于或等于30％，對于禁用**小于或等于40％。

滿足以上準確度和精密度要求，說明酶聯**方法可行，可用來檢測**殘留。

5、其他

（1）對于可用于多殘留檢測的試劑盒，以交叉反應率低的**做陽性添加測定臨界值(cut-off)。

（2）實際檢測樣品時要包括以下實驗：至少做兩條標準曲線，兩個陰性對照品，兩個添加臨界值(cut-off)的陽性對照品，兩個平行的待檢樣品。檢測結果出來后通過標準曲線形狀(符合檢測要求為S形)，IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率，樣品平行情況可確定檢測是否可信。