酶聯**分析夾心法檢測人干擾素(α2a,α2b)
重組人α2a/α2b干擾素(rHuIFN-α2a、rHuIFN-α2b)生產流程中不可缺少的一環是產品的質量監控，通常采用的是HEp-2/VSV或Wish/VSV系統檢測干擾素的生物活性。此系統常由于VSV或細胞的影響而不夠穩定，且檢測周期較長。我們用自制的2種針對rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b的單克隆抗體(McAb)建立了定量檢測rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b的雙McAb夾心ELISA，敏感性達60pg/ml，結果與生物學活性檢測相對應。試用于rHuIFN-α2a生產中的質量控制取得了滿意的結果。此試劑盒也能檢測人體產生的天然α干擾素，有用于基礎和臨床**研究的潛力。

一、原理

選用2種針對rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb，1種McAb作為包被抗體，另1種McAb標記辣根過氧化物酶(HRP)作為結合物，催化底物顯色。根據標準品OD值繪制標準曲線，在標準曲線上查出待檢標本的含量。

二、試劑盒提供試劑(供檢測22份標本)

1、包被抗體：應用時用0.05M,pH9.。6碳酸鹽緩沖液作100倍稀釋。

2、 酶標抗體：應用時用0.1％BSA-PBS作200倍稀釋(售出前已稀釋10倍)。

3、 標準品：rHuIFN-α2a(3ng/ml)，用時用0.1％BSA-PBS作倍比稀釋。

4、ABTS底物：ABTS 1mg＋0.1M,pH5.0檸檬酸緩沖液 2ml 3％ H２O２4μl(臨用時配)。

三、自備試劑和材料

1、 進口96孔或國產40孔聚苯乙烯ELISA板(敏感性以進口板稍好)。

2、0.1M,pH7.4 PBS配其它液體用。

3、 包被緩沖液：0.05M,pH9.6 Na２CO３-NaHCO３緩沖液。 

4、 洗滌液：0.05％Tween 20-PBS.

5、結合物稀釋液：0.1％BSA-PBS(用于稀釋標本、標準品和結合物)。

6、底物緩沖液：0.1M,pH5.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液。

7、ELISA讀數儀等。

四、操作步驟

向ELISA板中加入稀釋好的包被抗體100μl/孔

↓ 4℃ 24～48h

洗3次，加入10倍連續稀釋的待測標本

(做4個稀釋度即可)或倍比稀釋的標準品(6個稀釋度) 100μl/孔

↓37℃，1h

洗3次，加入稀釋好的酶標抗體100μl/孔

↓37℃，45min

洗4次，加入配好的ABTS底物液 100μl/孔

↓RT,30min

測410nm OD

↓ 

繪標準曲線

五、注意事項

1、 待檢標本必須無污染，無溶血。

2、標本稀釋后加入ELISA板時，注意從低濃度向高濃度依次加入。

3、結合物稀釋液和底物緩沖液中禁止加入疊氮鈉。
  



                                                                                                                             from dxy.cn